Isoleren van DNA

Isoleren van eigen DNA uit wangslijmvlies

 Doel

het zichtbaar maken van je eigen DNA, uit wangslijmvlies cellen.

Theorie

Wat is DNA eigenlijk? En wat heeft het voor functie?

DNA is eigenlijk de afkorting van: Deoxyribo-Nucleic-Acid (desoxyribonucleinezuur). DNA ligt in de celkern.Zo’n DNA molecuul bestaat uit twee lange ketens van nucleotiden, een nucleotide bestaat uit een fosfaatgroep, desoxyribose en vier verschillende stikstofbasen. Die vier verschillende stikstofbasen zijn: adenine, thymine, cytosine en guanine. Hierbij is adenine altijd verbonden met thymine en cytosine met guanine. Het DNA-molecuul ligt in een dubbele spiraal (helix) om de eiwitmoleculen heen. Dat is eigenlijk ook waar een chromosoom uit bestaat, een DNA-molecuul en veel eiwitmoleculen. Het DNA in de chromosomen bepaalt welke eiwitten er worden gesynthetiseerd in de ribosomen, daarvoor heeft het DNA een hulpje, namelijk RNA. een RNA-molecuul bestaat uit één nucleotideketen, en is ook veel korter dan een DNA-molecuul, het RNA kan door het kernmembraan heen naar de ribosomen, om dus te ‘vertellen’ welke eiwitten er gesynthetiseerd moeten worden.

Dat is dus DNA. Maar wat is de functie?

DNA is een drager van erfelijke eigenschappen.

Materiaal

-          wangslijmvlies cellen

-          water

-          benzinestift

-          schoon afsluitbaar buisje met een inhoud van 15mL

-          4 pipetjes

-          lysis buffer (2mL)

-          zoutoplossing (paar druppels)

-          koude ethanol (alcohol, paar druppels)

-          GC vial (klein glazen potje)

-          tangetje

Methode

Neem ten eerste het buisje met eigen naam erop (gebruik hiervoor de benzinestift), zodat het buisje niet verwisseld wordt met die van iemand anders. Doe 3mL water in het buisje, vervolgens circa 30 seconden op de wangen kauwen, bloed verbeterd het resultaat niet! Dit is nodig om een beetje wangslijmvlies los te krijgen en dus een goed eindresultaat te krijgen. Neem nu het water in de mond en spuug nu het water met het speeksel terug in het buisje.

Neem nu een schoon pipetje en voeg 2mL lysis buffer toe aan het buisje met het mengsel van water en speeksel. De lysis buffer zorgt ervoor dat het DNA vrijkomt in de oplossing doordat de membramen oplossen. Sluit nu het buisje en zwenk een paar keer rustig, dus niet schudden. Neem hierna een ander schoon pipetje en voeg een paar druppels zoutoplossing toe. De zoutoplossing zorgt ervoor dat het DNA neerslaat. Sluit het buisje af en zwenk weer een paar keer om te mengen. Laat nu het buisje 10 minuten rusten in de hand, zodat de eiwitten los komen van het DNA.

Vul nu een schoon pipet met koude alcohol (ethanol), houdt het buisje onder een hoek van 45° en voeg langzaam de koude alcohol toe. de alcohol moet koud zijn, zodat het DNA samen gaat klonteren. Laat het buisje 5 min staan. Sluit het buisje weer af en zwenk rustig 5 keer, . Als het goed is,  is nu het DNA zichtbaar in het buisje als een soort wit draderig materiaal. Probeer nu om het DNA uit het buisje te halen met een pipet, dit doe je in een GC vial en sluit het af met een tangetje.

Resultaten

Ik zie een soort langgerekt wit draadje in mijn potje, het is heel klein maar wel zichtbaar, het drijft niet op de oplossing die is meegenomen met het DNA, maar het zit er gewoon in, het lijkt ook een beetje een helix vorm te hebben, wat denk ik ook wel kan kloppen omdat DNA ook zo’n vorm heeft. Het is heel leuk om te zien.

Discussie

Bij mij zelf ging alles wel goed, ik kreeg daarom ook het gewenste resultaat. Ik vond het wel lastig om m’n DNA uit het buisje te krijgen met het pipetje om het vervolgens in het potje te stoppen.